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液相色谱使用有问题?快看看这篇
点击次数:368 发布时间:2020-04-15
  液相色谱作为一个既能用于微量组分的分析测定,又能用于大量的制备分离的仪器,具有灵活多样的特点,其应用范围已超过其他各种分离方法,尤其在中药样品的分析分离方面更为突出。而液相色谱在使用过程中容易出现一些问题,如果不对这些问题进行解决,就可能会影响分析结果,从而影响整个实验。因此,今天我们就来讨论一下液相色谱使用过程中可能会出现的问题。
 
  在液相色谱使用过程中,比较常见的主要有柱压异常(包括过高或者过低)、峰形异常、基线漂移等。下面我们就来讨论一下这几个问题的原因和解决方法。
 
  1、柱压异常
 
  柱压异常包括过高与过低。柱压过高是常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时,我们应该分段进行检查。
 
  2、峰形异常
 
  1)所有峰均为负峰。解决方法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。
  2)所有峰均为宽峰。解决方法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。
  3)色谱图中未出峰。解决方法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。
  4)一个峰或几个峰是负峰。解决方法:流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
  5)所出峰比预想的小。解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确;定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
  6)出现双峰或肩峰。解决方法:进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
  7)前伸峰。解决方法:进样量或样品浓度高;溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。
  8)拖尾峰。解决方法:柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至最低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。
  9)出现鬼峰。解决方法:进样阀残余峰,在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。
  10)出现平头峰。解决方法:检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。
 
  3、基线漂移
 
  一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因:
  1)流通池被污染或有气体。解决方法:用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(断开柱子更好)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸);
  2)柱温波动。解决方法:控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱;
  3)紫外灯能量不足。解决方法:更换新的紫外灯;
  4)检测器没有设定在最大吸收波长处。解决方法:将波长调整至最大吸收波长处;
  5)流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。解决方法:检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂;
  6)样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。解决方法:使用保护柱,如有必要,在进样之间。在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子;
  7)流动相的PH值没有调节好。解决方法:加适量的酸或碱调至合适PH值。
 
  总的来说,在遇到问题时,需要按照排除法依次确定导致问题的原因,之后要做的就是修正和调整并且记录问题,只要做好这样的工作就不怕以后会出现问题。
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